Odkrivanje bakteriofagov v mlečni industriji z uporabo vzorčevalnikov zraka MD8
Kljub globalnim prizadevanjem za razvoj fage odpornih starter kultur ostajajo bakteriofagi glavni vzrok motenj kislin in navsezadnje vzrok za kvarjenje izdelkov v mlečni industriji. V prispevku predstavljamo preprosto metodo kvantitativnega odkrivanja virusnih bakteriofagov z uporabo vzorcev zraka MD8 in želatinskih filtrov.
Kljub globalnim prizadevanjem za razvoj fage odpornih starter kultur ostajajo bakteriofagi glavni vzrok motenj kislin in navsezadnje vzrok za kvarjenje izdelkov v mlečni industriji. Za pravočasno zamenjavo fagesenzibilnih kultur s sevi, odpornimi proti fagom, in lokalizacijo notranjega vira okužbe je potrebno popolno in podrobno spremljanje fagov. V prispevku predstavljamo preprosto metodo kvantitativnega odkrivanja virusnih bakteriofagov v mlečnem mlečnem zraku. Ta metoda zagotavlja visoko zanesljivost pri odkrivanju bakteriofagov v običajnih pogojih skladiščenja in prevoza v praksi.
Pogoji za metodo vzorčenja v mlekarnah
Raziskave, opravljene v mlekarnah, temeljijo na metodi, preizkušeni z uporabo bakteriofagov mezofilnih streptokokov mlečne kisline (Lactococcus lactis). Pomembna merila, ki so imela ključno vlogo pri uporabi metode, so naslednja:
1. uporaba preprostega varovalnega sistema za resuspendiranje v vodi topnih želatinskih filtrov Sartorius;
2. preprosto upravljanje lastnosti filtra po vzorčenju;
3. visoka stabilnost zbranih fagov - tudi po nekajdnevnem shranjevanju filtra v različnih temperaturnih pogojih in po večkratnem določanju titra faga;
4. primernost metode za različne seve bakterijskih fagov, ki jih pogosto najdemo v mlekarnah (slika 1).
Slika 1. Skeniranje elektronskih mikrofotografij dveh sevov bakteriofagov mezofilnih streptokokov mlečne kisline (Lactococcus lactis) z okroglimi (izodiametričnimi) ali podolgovatimi (štrlečimi) glavami, ki jih pogosto najdemo v mlekarnah. Pas se zmanjša na 50 nm.
Metoda zaznavanja z uporabo želatinskih filtrov
Metoda zaznavanja bakteriofagov je bila izvedena z uporabo vzorčevalnika zraka MD8, ki se je izkazal za uspešno napravo za odkrivanje mikroorganizmov v zraku in odpravo njihovih škodljivih učinkov na testnem območju. Pri opravljeni raziskavi je bil uporabljen vzorčevalnik zraka MD8 z želatinastimi filtri s premerom 80 mm in velikostjo por 3 μm.
V intervalih vzorčenja 3 - 12 minut smo vzorčili bakteriofage s hitrostjo 100 l na minuto. Po vzorčenju smo filtre položili v sterilne vrečke iz polietilena 10 x 15, primerne za ta namen. Nato v vrečko dodamo 5-10 ml pufra, sestavljenega iz ¼ Ringerove raztopine z dodatkom 10% posnetega mleka, nato pa shranjene vzorce pošljemo v analizo v raziskovalni laboratorij.
Rezultati raziskav
S tukaj predstavljeno metodo lahko zaznamo virulentne bakteriofaze v širokem koncentracijskem gradientu. V neposredni bližini faznega aerosolnega vira je mogoče zaznati fagovo obremenitev do 3 × 108 enot, ki tvorijo obloge na m3 zunanjega mlečnega zraka. Spodnja meja zaznavanja je manj kot 5 fagov na m3 zunanjega zraka. V primeru mezofilnih mlečnokislinskih streptokokov v osnovi obstajata dva različna seva fagov, ki povzročata interferenco kislin (fagi z okroglimi, izodiametričnimi glavami in tisti z podolgovatimi, štrlečimi glavami; glej skeniranje mikrogramov na sliki 1). Predstavljena metoda je enako primerna za oba seva fagov.
Za več informacij o raziskavi glejte izvirni dokument z opombo o prijavi.